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ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)液配制簡(jiǎn)介

發(fā)布時(shí)間: 2021-07-16  點(diǎn)擊次數(shù): 1274次
   ATCC細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是氨基酸、葡萄糖、無機(jī)鹽、維生素和微量元素等。為了維持穩(wěn)定的pH,培養(yǎng)液中一般有一個(gè)pH緩沖系統(tǒng),同時(shí)常加入少量的酚紅作為pH指示劑。另外培養(yǎng)液中一般需要加入一定量的血清。
  ATCC細(xì)胞培養(yǎng)液中的氨基酸除了13種細(xì)胞生長(zhǎng)所必須的氨基酸外,往往加入一些非必需的氨基酸以促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)。在必需的氨基酸中,L-谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定(在4℃培養(yǎng)溶液中半衰期為3個(gè)星期,37℃中為1個(gè)星期),需要在使用時(shí)加入。所有培養(yǎng)器皿均需清水沖洗2-3d,達(dá)兩次ddH2O,每遍洗刷3-4次,加塞包裝,置于烤箱中干燥消毒,于培養(yǎng)前1天進(jìn)行。
  ATCC細(xì)胞培養(yǎng)液的配制明細(xì):
  1.解剖液:以無機(jī)鹽(去除Ca2+,Mg2+)加葡萄糖配制成PBS緩沖液,保持一定的滲透壓和pH值。
  2.基礎(chǔ)培養(yǎng)基(MEM):主要為多種氨基酸,加入葡萄糖,雙蒸餾水溶解。
  3.接種培養(yǎng)液:用于胰酶消化后的細(xì)胞分散,做成細(xì)胞懸液,其成分為MEM含1%谷氨酰胺,另加入10%馬血清,當(dāng)天配制。
  4.維持培養(yǎng)液:接種后24h,全部換成此液,后每2周換一次,每次換1/2。其成分為MEM中含5%馬血清,1%谷氨酰胺,及適量的支持性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

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