發(fā)布時(shí)間： 2021-09-14 點(diǎn)擊次數(shù)： 952次
ATCC細(xì)胞的說明書中有關(guān)于細(xì)胞復(fù)蘇和傳代的詳細(xì)步驟。除說明書外，還有另一份重要文件-COA（Certificate of Analysis）。COA中包含具體批次信息，如每管細(xì)胞的數(shù)量，建議復(fù)蘇使用的培養(yǎng)基用量，已知細(xì)胞的傳代代次等重要信息。
部分培養(yǎng)基如DMEM，各廠商提供產(chǎn)品雖然名稱相同，但成分也會(huì)有差異。為了保證細(xì)胞大的復(fù)蘇率和維持細(xì)胞特性，建議購(gòu)買細(xì)胞的時(shí)候，同時(shí)購(gòu)買ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)基。
篩選ATCC細(xì)胞株的兩種技術(shù)介紹：
1.轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細(xì)胞系
對(duì)大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低。對(duì)于基因過表達(dá)，如果轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40%，基因過表達(dá)尚可。但是對(duì)于基因干擾實(shí)驗(yàn)，對(duì)轉(zhuǎn)染效率要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因過表達(dá)，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無(wú)法滿足。
另外，質(zhì)粒游離于細(xì)胞質(zhì)中，很快降解，無(wú)法滿足較長(zhǎng)時(shí)間的檢測(cè)項(xiàng)目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建耗時(shí)耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2.病毒感染篩選穩(wěn)定ATCC細(xì)胞株
病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達(dá)、宿主范圍廣，感染效率高，且與細(xì)胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細(xì)胞株的理想載體。
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