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ATCC細胞如何進行傳代培養(yǎng)操作?

發(fā)布時間: 2021-02-02  點擊次數(shù): 1081次
   ATCC細胞使用切忌與手接觸,要用潔凈的藥勺,量筒或滴管取用,不允許用同一種工具同時連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后,應(yīng)將工具洗凈(藥勺要擦干)后,才可取用另一種試劑。
  ATCC細胞的傳代培養(yǎng)操作步驟:
  1.吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
  2.向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。
  3.置37℃孵箱或室溫(25℃)下進行消化,2-5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察,當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后,應(yīng)立即中止消化。
  4.吸出消化液,向瓶內(nèi)加入Hanks液少量,輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶,把殘留消化液沖掉,然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化,在吸除胰蛋白液后,可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液,終止消化。
  5.使用彎頭吸管,吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液,按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔,以防用力過猛損傷細胞。
  6.用計數(shù)板計數(shù)后,分別接種于新的培養(yǎng)瓶中,置CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
  7.細胞培養(yǎng)換液時間應(yīng)根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般2-3d后應(yīng)換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面,即可使用;也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液。
  相關(guān)注意事項:
  1.掌握好細胞消化的時間,消化時間過短時,細胞不宜從瓶壁脫落,過長的消化會導(dǎo)致細胞脫落、損傷。
  2.掌握好消化濃度,當(dāng)消化液濃度過高時,消化時間應(yīng)縮短,過低時細胞消化時間相對延長。

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